肝组织模型试剂盒A

说明

肝组织模型试剂盒提供了用于包封肝细胞和/或星状细胞的最佳生物墨水，然后进一步利用所提供的抗体通过免疫荧光或免疫组织化学进行功能分析。

包含：

CELLINK LAMININK 111 bioink-3 mL

Ⅰ型胶原抗体*-100µL

ABCC2抗体*-100µL

CYP3A43抗体*-100µL

*宿主：兔，已验证物种反应性：人 1

储存

生物墨水应该储存在摄氏4到8度之间。生物墨水的保质期是两个月。包装上注明了有效期。在储存之前，确保墨盒盖上盖子，以防干燥。保持生物墨水不冻-将生物墨水放入冷冻室有可能损害其印刷适性。

抗体到达后应保存在-20°C。当储存在-20°C时，抗体的作用至少为12个月。注意，抗体是非常稳定的，当适当储存时，可以使用更长的时间。抗体在-20°C保存前不需要等分。由于抗体是在甘油中提供的，它们在推荐的储存温度下不会冻结，因此不会暴露于冷冻/解冻循环中。

与细胞混合

我们建议将生物墨水与高浓度的细胞混合。您可以手动混合细胞，也可以使用我们革命性的细胞混合器，以获得更大的数量。CELLMIXER的设计目的是简化混合过程，并使细胞的存活率提高，从而获得均匀的悬浮液。有关更多详细信息，请参阅Mixing with Cells Protocol CELLINK

生物打印组织模型

肝组织模型可以通过在所需生物墨水（CELLINK LAMININK 111）中逐层生物打印肝细胞和/或星状细胞来生成。如果用原代细胞进行生物打印，有限的细胞数目将限制构建体的大小。因此，10-50µL的结构、液滴或圆盘足以用于药物筛选目的。还可以生成更大的构造，特别是当需要单元格分层时。

交联

用含CaCl2的交联溶液进行GelXA LAMININK 111生物打印的构建体的交联。生物打印后，应用足够的液滴交联溶液覆盖构建物。30秒到5分钟的孵育时间对于大多数结构来说是足够的。孵育后，除去交联液，用含钙和镁的Hank’s平衡盐溶液(HBSS+/+)或基础细胞培养基洗涤并加入所需的细胞培养基。

组织学分析

要获得生物打印结构的5-8µm切片，请参阅CELLINK网站支持部分下的固定、嵌入和切片协议CELLINK系列。然后按照免疫荧光染色程序CELLINK  Series对组织模型进行抗体染色。I型胶原、ABCC2和CYP3A43抗体的稀释度如下：

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CELLINK LAMININK 111 Bioink的描述

CELLINK层状油墨111除了对光不敏感之外，在任何温度下具有稳定的印刷适性是有利的。利用CELLINK的优化的染色和分析协议，CELLINK LAMININIK 111生物墨水提供了一个平滑的3D生物打印过程，其中的焦点允许在获得的结果。CELLINK bioink中的纳米纤维素提供了可影响不同肝细胞类型的相互连接的原纤维网络，例如，潜在地促进胆管网络的形成或共培养组织模型中星状细胞的排列。

抗体描述

肝组织模型的直接功能分析可以通过免疫荧光或免疫组化的组织学分析进行。肝组织模型试剂盒中包含的抗体用于肝细胞和星状细胞在生物打印构建体中的单一或共培养。I型胶原抗体是用来评估在纤维化诱导过程中星状细胞产生I型胶原的情况。ABCC2抗体用于评价肝细胞中转运体多药耐药蛋白2(MRP2),CYP3A43抗体用于分析细胞色素P450中负责药物代谢的一种酶。

肝抗体数据

用包括初级抗体I型胶原、ABCC2和CYP3A43的免疫荧光分析的内部数据证明了对不同肝细胞类型和来源的优化使用。

图1:实施例I型胶原在用共培养LX2和HepG2细胞增强的3D生物打印CELLINK LAMININK 111中的表达。合并图像I型胶原表达（1:50稀释度），绿色，细胞核用DAPI（1:50稀释度）染色，蓝色。二抗：Alexa Fluor 488。放大倍数：10倍，刻度线：100µm。

图2. 用共培养的LX2 和HepG2 细胞增重的3D生物打印的CELLINK LAMININK 111 中ABCC2表达的实例。ABCC2(MRP2)抗体既可用于肝细胞HepG2细胞株的染色，也可用于原代肝细胞的染色。合并图像ABCC2表达（1:20 0稀释度）,绿色,细胞核染色DAPI（1:50 稀释度）,蓝色.二抗：Alexa Fluor 488。放大倍数：10倍，刻度线：100µm。

图3.作为肝组织模型的3D生物打印的原代肝细胞中CYP3A43表达的实例。CYP3A43抗体可用于原代肝细胞的团簇和单细胞染色。合并图像CYP3A43表达（1:10  00稀释度）,绿色,细胞核DAPI（1:50稀释度）染色,蓝色。二抗：Alexa Fluor 488。放大倍数：10倍，刻度线： 100µm。